وبلاگ

شرقی

پل صفائیه

˝۴۵ ‘۲۱˚۳۲

شمالی

˝۵۵ ‘۲۶˚۵۱

شرقی

شکل ۳-۳) ایستگاه چمگردان. الف- کارخانه ذوب­آهن ب- زمین­های کشاورزی در حاشیه ایستگاه [نگارنده].
ماهیان صید شده از هر از ایستگاه به طور جداگانه و به صورت زنده در کیسه های حاوی آب مربوط به آن ایستگاه واکسیژن به آزمایشگاه دانشکده منابع طبیعی واقع در دانشگاه صنعتی اصفهان منتقل شدند.
۳-۳- زیست­سنجی
برای انجام زیست­سنجی، ماهیان در محلول MS₂₂₂ با غلظت ۱۰۰ ppm بیهوش و موارد زیر در آن­ها اندازه گیری شد:

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

وزن بدن و گناد با بهره گرفتن از ترازو و با دقت ۰۱/۰ گرم
پارامترهای طولی (طول کل، چنگالی و استاندارد) با دقت ۱ میلی­متر
۳-۴- فراسنجه­های خونی
بلافاصله پس از صید اقدام به بیهوشی ماهیان و خون­گیری از طریق ساقه دمی و با بهره گرفتن از سرنگ آغشته به EDTA 5/0% شد (شکل ۳-۴). نمونه­های خونی درکوتاه­ترین زمان و در دمای کمتر از چهار درجه سانتی ­گراد جهت بررسی­های زیر به آزمایشگاه شیلات دانشکده منابع طبیعی منتقل شد.
۳-۴-۱- اندازه ­گیری هموگلوبین
برای اندازه ­گیری هموگلوبین (Hb) از روش سیانوهموگلوبین استفاده شد. در این روش به میزان ۲۰ میکرولیتر نمونه خون مقدار ۵ میلی­لیتر محلول درابکین^[۶۷] افزوده می­ شود. این محلول حاوی سیانید پتاسیم است. طی واکنشی، سیانید پتاسیم مت هموگلوبین را به سیان مت هموگلوبین تبدیل می­ کند. این ماده دارای جذب حداکثر در ۵۴۰ نانومتر است. مقدار جذب نوری توسط دستگاه اسپکتروفتومتر اندازه ­گیری و در نهایت با منحنی استاندارد تعیین هموگلوبین مقایسه می­گردد [۴].
شکل۳-۴) خون­گیری از ساقه دمی عروس­ماهی زاینده­رود [نگارنده].
۳-۴-۲- اندازه ­گیری هماتوکریت
هماتوکریت (HCT) روشی برای اندازه ­گیری حجم توده­ای یا ذره­ای یاخته­های قرمز نسبت به حجم کل خون است که بر حسب حجم گلبول قرمز در ۱۰۰ میلی­لیتر خون بیان می­ شود. برای اندازه ­گیری هماتوکریت، لوله­های موئینه میکروهماتوکریت را به ماده ضد انعقاد آغشته و با نمونه خون تماس داده شد تا لوله از خون پر شود. پس از این­که سه چهارم لوله از خون پر شد، سر لوله با انگشت و سپس با خمیر مخصوص مسدود شد. سپس این لوله به داخل سانتریفیوژ میکروهماتوکریت منتقل و به مدت ۵ دقیقه با سرعت حداقل ۷۰۰۰ دور بر ثانیه سانتریفیوژ و درصد هماتوکریت با بهره گرفتن از خط­کش مخصوص قرائت شد [۴، ۴۸].
۳-۴-۳- شمارش گلبول­های قرمز
در پزشکی جهت شمارش گلبول­های قرمز خون (RBC)^[68] از دستگاه­های خودکار شمارنده سلول استفاده می­ شود. اما در ماهیان به دلیل اندازه بزرگ و هسته­دار بودن اریتروسیت­ها امکان استفاده از این دستگاه­ها وجود ندارد. بنابراین به این منظور از لام هموسیتومتر نئوبار استفاده می­ شود. اما چون تراکم سلول­های خونی بالاست و امکان روی هم افتادگی این سلول­ها وجود دارد و نیز جهت تفکیک سلول­های مختلف از یکدیگر، عمل رقیق سازی خون انجام می­ شود. برای رقیق سازی یاخته­های قرمز خون از پیپت ملانژور قرمز استفاده می­ شود. برای استفاده از این نوع پیپت، تا درجه ۵/۰ آن از خون و بقیه حجم لوله تا درجه ۱۰۱ از محلول رقیق کننده پر می­ شود (رقت یک دویستم). در این مطالعه از محلول رقیق کننده Dace استفاده شد. محلول Dace از ترکیب ۱/۰ گرم ترکیب بریلیانت کریزل بلو^[۶۹]، ۸/۳ گرم سدیم سیترات و ۲/۰ میلی­لیتر فرمالدهید ۳۷% در ۱۰۰ میلی­لیتر آب مقطر ایجاد می شود [۳۰]. پس از قرار دادن لامل روی لام هموسیتومتر، سه تا چهار قطره از مایع درون پیپت را تخلیه شد تا در فاصله بین آن دو جریان یافته و حجره لام را پرکند. لام در زیر میکروسکوپ قرار گرفت و یاخته­های قرمز موجود در ۵ مربع کوچک از ۲۵ مربع مرکزی با لنز ۴۰ شمارش شد (شکل ۳-۵). برای محاسبه تعداد گلبول­های قرمز در هر میلی­متر مکعب خون با رقت یک دویستم از رابطه ذیل استفاده شد:
(۳-۲)
(۳-۳)
در این رابطه N مجموع تعداد یاخته­های قرمز شمارش شده در یک میلی­متر مکعب، n مجموع تعداد یاخته­های قرمز شمارش شده در ۵ مربع کوچک، S مساحت ۵ مربع (یک پنچم مترمربع)، h ارتفاع هر مربع (۱/۰ میلی­متر) و d رقت خون در محلول رقیق کننده (یک دویستم) را نشان می­دهد [۴].
۳-۴-۴- شمارش گلبول­های سفید
به دلیل تراکم کم­تر سلول­های سفید خون (WBC)^[70] نسبت به یاخته­های قرمز، رقیق سازی با رقت کم­تری صورت می­گیرد. به این منظور از پیپت ملانژور سفید استفاده می­ شود. برای استفاده از این نوع پیپت، تا درجه ۵/۰ آن از خون و بقیه حجم لوله تا درجه ۱۱ از محلول رقیق کننده ریس پر می­ شود (رقت یک بیستم). سپس همانند روش توضیح داده شده، سه تا چهار قطره مایع درون پیپت را تخلیه شد تا در فاصله بین آن دو جریان یابد و حجره لام را پرکند. لام در زیر میکروسکوپ قرار گرفت و یاخته­های سفید موجود در چهار مربع کوچک که در چهار گوشه مربع بزرگ قرار دارند با لنز ۲۰ شمارش شد (شکل۳-۳). برای محاسبه تعداد گلبول­های قرمز در هر میلی­متر مکعب خون با رقت یک دویستم از رابطه ذیل استفاده شد:
(۳-۴)
(۳-۵)
در این رابطه N مجموع یاخته­های سفید شمارش شده در یک میلی­متر مکعب، n مجموع تعداد یاخته­های سفید شمارش شده در چهار۴ مربع، S مساحت چهار مربع (چهار میلی­مترمربع)، h ارتفاع هر مربع (۱/۰ میلی­متر) و d رقت خون در محلول رقیق کننده (یک بیستم) را نشان می­دهد [۴].
شکل ۳-۵) لام هماسیتومتر [۴].
۳-۴-۵- شمارش افتراقی گلبول­های سفید
تهیه گسترش خونی به روش دولامی انجام گرفت. در این روش یک لام به عنوان گسترش دهنده و لام دیگر که قطره خون روی آن قرار می­گیرد، لام گسترش نام دارد. پس از ایجاد گسترش خونی، جهت جلوگیری از تغییرشکل یاخته­ها، تاثیر میکرواورگانیسم­ها و کاهش کیفیت، لام گسترش بلافاصله با متانول ۹۵% تثبیت و سپس خشک می­گردد. سپس به مدت ۱۰-۳۰ دقیقه با محلول گیمسا رنگ­آمیزی و با آب شستشو و خشک می­ شود. این محلول با داشتن اجزاء اسیدی و بازی، قسمت­ های مختلف هر نوع سلول را به رنگ مشخصی رنگامیزی می­ کند و به این صورت سلول­ها قابل تشخیص و شمارش می­گردند. برای تهیه محلول گیمسا ابتدا ۱ گرم پودر گیمسا با ۵۰ میلی­لیتر گلیسرول همراه با یک هم زن مغناطیسی به مدت ۱ ساعت در ۶۰ درجه سانتی گراد حرارت داده شد. بعد از سرد شدن این ترکیب، ۵۰ میلی­لیتر متانول به آن اضافه و با کاغذ صافی فیلتر شد. این استوک با بهره گرفتن از آب شهری تا ۱۰% رقیق شد و برای رنگ آمیزی گسترش­ها مورد استفاده قرار گرفت. درهرگسترش تعداد ۱۰۰ عددگلبول سفید به صورت تصادفی شمارش و درصد فراوانی آن­ها محاسبه شد [۱۹].
۳-۴-۶- شاخص­ های ثانویه خون­شناسی